電子顯微鏡以其卓越的分辨率，為我們揭示了光鏡下無(wú)法捕捉的生物樣品細節。但為了更好地利用這一強大工具，理解不同的生物電鏡成像方式及其相應的樣品制備流程至關(guān)重要。

　　針對不同的樣品和不同的成像目標，蔡司掃描電鏡生物樣品制樣方法多種多樣，并可能需要根據具體情況對制樣方法進(jìn)行調整。但是制樣操作基本步驟的一些基本原則和注意事項是共通的。

　　取材：取材的好壞直接決定了最終成像的結果，一定要打起12分的注意。

　　準 樣品盡量新鮮，取材部位準確;取材部位解剖水平的準確定位要求誤差應≤1mm

　　快 樣品在離體后以最快的速度浸入初固定液

　　小 取材標本粒徑必須與固定液的固定能力相適應，一般以1mm3的粒徑為宜

　　輕 解剖用具要鋒利，動(dòng)作要輕巧，避免機械牽拉

　　冷 生理溫度固定，低溫操作, 避免細胞自溶

　　固定：對樣品進(jìn)行充分而合適的固定可以穩定組織細胞中的各種成分，讓超微結構在后續的處理步驟中得到更好的保留。

　　通常使用醛類(lèi)化合物(戊二醛、多聚甲醛)和鋨酸對樣品進(jìn)行固定

　　固定劑要足量，使樣品充分浸沒(méi)在固定液中

　　根據樣品情況選擇合適的緩沖液，并對溶液進(jìn)行pH值和滲透壓的調節

　　漂洗：各步驟之間漂洗要充分，防止化學(xué)試劑間發(fā)生反應形成沉淀。

　　脫水：通常使用乙醇和丙酮進(jìn)行逐級脫水，根據樣品情況對脫水的梯度和時(shí)間進(jìn)行調整，注意保證樣品脫水要徹底。

　　滲透包埋：在脫水劑中逐步提高樹(shù)脂的濃度，使樹(shù)脂緩慢浸入樣品，最終完全替代脫水劑，在合適的條件下使樹(shù)脂聚合硬化，可以根據應用需求對樹(shù)脂配方進(jìn)行調整以實(shí)現不同硬度的包埋效果。

　　染色：為了增加樣品成像的襯度，可以在包埋前對樣品塊進(jìn)行染色，也可以對超薄切片進(jìn)行后染色。通常使用的染色試劑包括乙酸雙氧鈾、檸檬酸鉛、天冬氨酸鉛等，要注意試劑的配置和過(guò)濾以免發(fā)生重金屬沉淀。

　　*需要對樣品進(jìn)行表面形貌觀(guān)察時(shí)還要注意：

　　清洗：固定前要充分去除樣品表面的黏液和污物，暴露樣品表面的微細結構。

　　臨界點(diǎn)干燥：目前的臨界點(diǎn)干燥儀大部分為半自動(dòng)或全自動(dòng)儀器，操作時(shí)注意嚴格遵守操作規程。樣品干燥后取放要輕柔，防止造成樣品破損。

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